SCI论文解读(33):HIF-1α/miR-424通过下调UNC5B和SIRT4调节膀胱癌细胞顺铂耐药的机制研究

发布单位: 广东省医学会医学科研实验室建设与管理学分会  /  阅读:349 次  /  2022/8/24 8:11:06

蔡轶,广州医科大学药学院,副研究员,硕士生导师,2012年毕业于中山大学获得博士学位。曾在美国加州大学洛杉矶分校和新加坡国立大学进行访问学者研究工作。主要研究方向为心血管药理学和肿瘤药理学,目前以第一作者或通讯作者身份发表SCI论文10余篇。现为广东省医学会医学科研实验室建设与管理学分会青委会副主委。

 

1. 引言

膀胱癌的化疗耐药性一直被认为是亟待解决的严重问题之一。研究表明,肿瘤细胞通过维持缺氧状况来促进膀胱癌组织的发展和提高化疗耐药性。其中,miR-424在调节膀胱癌细胞顺铂(CDDP)敏感性中有着关键作用。然而,具体调控机制尚不清楚 

2. 结果展示

1miR-424在调节膀胱癌细胞顺铂敏感性方面起着关键作用。研究表明,某些抗癌药物如CDDP参与了化疗耐药性的获得以及癌症干细胞的富集,但其机制尚不清楚。为阐明CDDP对膀胱癌耐药的分子机制,本研究检测了 miR-424及其初始转录物在 T245637细胞中的表达水平,为了更好地支持检测结果,提取T24细胞的总RNA进行ChIP-qPCR实验。与此同时,还做了siRNA 介导的HIF-1α基因敲除T24细胞的CHIP实验。研究表明CDDP介导的 miR-424上调是以hif-1α依赖的方式调控的。

 

2)为了探讨 miR-424 CDDP 诱导的膀胱癌细胞中的生物学意义,本研究进行了miR-424对膀胱癌细胞CDDP耐药的体外研究。通过RT-PCR检测和流式细胞仪分析,结果表明miR-424能够降低膀胱癌细胞中 CDDP 依赖性细胞凋亡。

3)进一步,基于 web 的软件 TargetScan miRanda 寻找其下游效应因子,经过分析,最终确定了与凋亡相关的 UNC5B SIRT4 miR-424的潜在下游靶点。本研究通过荧光酶素报告分析,转录因子为miR-424,靶启动子分别为UNC5B SIRT4。与此同时,在 T245637细胞中进行了 siRNA 介导的 UNC5B SIRT4基因沉默,并进行Western blot 分析。研究表明,miR-424通过下调与CDDP 诱导的膀胱癌细胞细胞凋亡相关的下游效应因子 UNC5B SIRT4,使对膀胱癌细胞对CDDP产生耐药性。

45637细胞接种对照慢病毒载体或 miR-424慢病毒载体裸鼠皮下接种。分组给小鼠服用CDDP(每天10毫克/千克)或单独服用卡介苗。在 CDDP 处理后的指定时间点,测量各组肿瘤体积,并检测UNC5B SIRT4的表达水平,以及进行免疫组织化学染色检测 ki67阳性细胞和tunel 阳性细胞。这些研究结果表明 miR-424在体内通过下调 UNC5B SIRT4来抑制 CDDP 介导的膀胱癌细胞死亡。

5)利用 TCGA 公共 RNA-seq 数据库对 miR-424的表达水平进行了分析,发现在人膀胱癌中miR-424的高表达水平与 UNC5B SIRT4的表达水平呈明显的负相关,结果提示 miR-424的增强表达通过下调 UNC5B / SIRT4在膀胱癌中发挥有害作用。

3. 研究思路

4. 总结

本研究发现,CDDP诱导的miR-424的表达增加通过下调UNC5BSIRT4来降低膀胱癌细胞对CDDP的敏感性,因此,miR-424是有效治疗膀胱癌患者的有希望的分子靶点。从临床角度来看,CDDP联合抑制HIF-1α/miR-424通路可能对低氧和常氧膀胱癌细胞产生显著影响。

 

原文链接:htt://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32522234/J Exp Clin Cancer Re, IF:11.64