陈日新，广东省人民医院医学研究部助理研究员，毕业于中山大学肿瘤防治中心基础医学专业，研究方向为非编码RNA转录后调控与肿瘤转移的基础及转化研究，发现多个肿瘤转移的关键分子标志物并阐明其调控机制。目前已发表SCI论文8篇，其中以第一作者/共同第一作者在Nature Communications、Clinical Cancer Research发表SCI论文2篇。

研究背景：

    circRNA是一类共价闭合的环状RNA。不同生理条件下，circRNA的表达具有极强的动态性。已有研究发现，circRNA可以通过吸附miRNA参与到肿瘤的发生过程，但circRNA如何参与肿瘤的EMT过程，其分子机制仍不为人知。

    外泌体是一类从细胞释放到胞外微环境的直径在30-100nm之间的具有膜结构的盘状小囊泡，其内包裹着miRNA、mRNA和蛋白，行驶着胞间信息交流的功能。已有文章证实肿瘤细胞可以释放包含着circRNA的外泌体到血清中，但其病理学功能仍未知。UCB病人的血液和尿液中外泌体的数量有明显的上升，研究外泌体中包含的circRNA及其生物学功能，具有重要的临床意义。

结果展示：

    1. 作者通过circRNA芯片检测了三对膀胱尿路上皮癌（UCB）与癌旁组织的circRNA表达情况，分析发现circPRMT5的表达量在肿瘤组织中上调最明显。随后临床大样本验证circPRMT5在UCB肿瘤组织中普遍上调，并与UCB患者的不良预后相关。随后，作者对circPRMT5进行了一系列分子学鉴定，并发现circPRMT5定位于细胞质中。

    2. 作者分别构建了circPRMT5敲降和过表达的UCB细胞，进行了体内外功能实验。结果显示：敲低circPRMT5后，UCB细胞的迁移和侵袭能力明显受到抑制；而过表达circPRMT5可以增强UCB细胞的迁移和侵袭能力。

    3. 作者对circPRMT5敲降和过表达的UCB细胞，进行上皮marker（E-cadherin）和间质marker（Vimentin 、N-cadherin）蛋白表达水平的检测，并结合细胞免疫荧光实验的结果，证明了circPRTM5可以促进UCB细胞的EMT进程。

    4. 作者通过AGO2 RIP实验，发现内源性circPRMT5可与AGO2结合，进入RISC复合物。用miRNA mimic文库筛选出5个miRNA可以与circPRMT5结合，并通过TargetScan预测miRNA的结合位点。双荧光素酶报告系统进一步验证，circPRMT5可作为miR-30c的吸附海绵。RNA pull down实验结果显示， miR-30c可以被circPRMT5探针富集。RNA FISH实验进一步验证，circPRMT5与miR-30c在细胞浆内存在共定位。

    5. 作者通过体内外回补实验发现，circPRMT5通过miR30-c途径促进UCB细胞侵袭、转移。进一步的WB蛋白检测、细胞免疫荧光实验结果显示，circPRMT5通过miR-30c途径调控UCB的EMT过程。

 

    6. 作者通过miRanda数据库分析，miR-30c可直接结合EMT进程相关的转录因子SNAIL1的3’UTR区域。通过临床大样本检测和TCG数据库分析，发现circPRMT5调控miR-30c/SNAIL1/E-cadherin通路。随后作者分离了UCB患者血浆和尿液外泌体，表型鉴定后，RT-qPCR分析发现circPRMT5富集在这些外泌体中，其表达水平与肿瘤淋巴结转移和分期进展呈正相关，且与miR-30c的表达水平呈负相关，提示UCB细胞会分泌含有高水平circPRMT5的外泌体，进入循环血液或者尿液，通过调控miR-30c，促进肿瘤发展和转移。

研究思路：

总结：

  该文章探究了UCB肿瘤组织中circRNAs的表达情况，发现circPRMT5的表达在UCB组织中显著升高，且与病人的不良预后相关。作者通过一系列实验，阐明了circPRMT5通过海绵吸附miR-30c，调控SNAIL1/E-cadherin信号通路，促进UCB细胞的侵袭能力和EMT途径。此外，UCB细胞分泌含有高水平circPRMT5的外泌体，进入循环血液或者尿液，促进肿瘤发展和转移。该研究提示，circPRMT5可作为UCB患者的预后生物标志物，也可作为治疗UCB患者的潜在靶点。

原文链接：

https://clincancerres.aacrjournals.org/content/24/24/6319.long (Clinical Cancer Research, IF=10.107）

 

特别鸣谢

 

本文转自：GD省医公共实验室公众号

 

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